A Multiplex real-time PCR for detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae in clinical samples from Brazilian commercial poultry flocks.

Mycoplasma gallisepticum (MS) and Mycoplasma synoviae (MS) are important avian pathogens and cause economic losses to the poultry industry. Molecular biology techniques are currently used for a rapid detection of these pathogens and the adoption of control measures of the diseases. The aim of this study was to develop and validate a technique for simultaneous detection of MG and MS by multiplex real time polymerase chain reaction (PCR). The complete assay (Multiplex MGMS) was designed with primers and probes specific for each pathogen and developed to be carried out in a single tube reaction. Vaccines, MG and MS isolates and DNA from other Mycoplasma species were used for the development and validation of the method. Further, 78 pooled clinical samples from different poultry flocks in Brazil were obtained and used to determine the sensitivity and specificity of the technique in comparison to 2 real time PCR assays specific for MG (MG PCR) and MS (MS PCR). The results demonstrated an agreement of 100% (23 positive and 44 negative samples) between Multiplex MGMS and MG PCR in the analysis of 67 samples from MG positive and negative poultry flocks, and an agreement of 96.9% between Multiplex MGMS and MS PCR in the analysis of 64 samples from MS positive and negative poultry flocks. Considering the single amplification tests as the gold standard, the Multiplex MGMS showed 100% of specificity and sensitivity in the MG analysis and 94.7% sensitivity and 100% specificity in the MS analysis. This new assay could be used for rapid analysis of MG and MS in the poultry industry laboratories.

A Multiplex real-time PCR for detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae in clinical samples from Brazilian commercial poultry flocks

Mycoplasma gallisepticum (MS) and Mycoplasma synoviae (MS) are important avian pathogens and cause economic losses to the poultry industry. Molecular biology techniques are currently used for a rapid detection of these pathogens and the adoption of control measures of the diseases. The aim of this study was to develop and validate a technique for simultaneous detection of MG and MS by multiplex real time polymerase chain reaction (PCR). The complete assay (Multiplex MGMS) was designed with primers and probes specific for each pathogen and developed to be carried out in a single tube reaction. Vaccines, MG and MS isolates and DNA from other Mycoplasma species were used for the development and validation of the method. Further, 78 pooled clinical samples from different poultry flocks in Brazil were obtained and used to determine the sensitivity and specificity of the technique in comparison to 2 real time PCR assays specific for MG (MG PCR) and MS (MS PCR). The results demonstrated an agreement of 100% (23 positive and 44 negative samples) between Multiplex MGMS and MG PCR in the analysis of 67 samples from MG positive and negative poultry flocks, and an agreement of 96.9% between Multiplex MGMS and MS PCR in the analysis of 64 samples from MS positive and negative poultry flocks. Considering the single amplification tests as the gold standard, the Multiplex MGMS showed 100% of specificity and sensitivity in the MG analysis and 94.7% sensitivity and 100% specificity in the MS analysis. This new assay could be used for rapid analysis of MG and MS in the poultry industry laboratories.

Comparision of mutability induced by gamma radiation and DES in Drosophila melanogaster strains selected for resistance

Com o objetivo de verificar se linhagens de Drosophila melanogaster selecionadas para resistência a induçäo de mutaçöes letais recissivas no cromossomo X, também apresentavam resistência a induçäo de mutaçöes letais por agentes químicos, foram realizados testes com raios gama de Co60 (4840 R), testes com DES (0.3, 0.4 e 0.5%) e testes com tratamentos conjuntos Co60 (4840 R) e DES (0.4%). Os testes com uma dose de 4840 R de Cco60 comprovaram que as linhagens selecionadas para radiorresitência ainda mantinham esta característica após 20 geraçöes de suspensäo da seleçäo e das irradiaçöes prévias. O DES induziu uma taxa de letais recessivos ligados ao sexo significantemente mais baixa nas linhagens radiorresistentes comparativamente aos controles. Estes resultados sugerem a existência de mecanismos comuns de reparo aos danos produzidos por agentes físicos e químicos. Nos tratamentos conjuntos de Co60 e Des observou-se um acréscimo na taxa de letais, com efeito quase aditivo nas linhagens radiorresistentes, eqnuanto que nos controles, a taxa de letais foi semelhante aquelas obtidas nos tratamentos isolados. Estes resultados seguerem que o DES inibiu ou inativou parcialmente as enzimas do reparo, de forma que lesöes pré-mutacionais e induzidas pela radiaçäo e pelo próprio DES foram fixadas

Effect of caffeine on the radioresistance and radiosensitivity of Drosophila melanogaster

Foi analisado o efeito do pré-tratamento com cafeína na induçäo de letais na linhagem radiorresistente CO3 e na sensível RC1. Os resultados obtidos mostraram que o tratamento isolado com cafeína näo tem um efeito mutagênico, tanto na linhagem resistente quanto na sensível. No entanto, o pré-tratamento com cafeína aumentou a freqüência de letais induzidos por radiaçäo na linhagem resistente (até o nivel da sensível näo pré-tratada), mas näo modificou a freqüência de letais na linhagem sensível, de modo que desaparecem as diferenças significativas na induçäo de letais existentes entre elas quando do tratamento isolado com radiaçäo. Dois tipos de resultados foram obtidos na análise do efeito da cafeína em combinaçäo com o EMS: quando da freqüência de letais induzidos foi baixa, o pré-tratamento com a cafeína aumentou a freqüência em ambas as linhagens; quando a freqüência foi alta, observou-se um pequeno aumento na resistente e uma pequena diminuiçäo na sensível. Estes resultados, tomados em conjunto, estäo de acordo com a sugestäo de que a diferença de sensibilidade observada entre as duas linhagens seja devido a diferenças no reparo do dano pré-mutacional. Apoio adicional a esta conclusäo foi obtido pela verificaçäo de que o pré-tratamento com cafeína aumentou de maneira significativa a freqüência de mutaçäo induzida em espermatozóides e espermátides e diminuiu a de espermatócitos tratados com EMS. Por outro lado, a observaçäo de que o efeito na linhagem resistente foi muito maior que o obtido na linhagem sensível, apoia a sugestäo da existência de diferenças nos níveis de reparo das duas linhagens analisadas

Action of the pyrrolizidine alkaloid integerrimine in inducing meiotic chromosome aberrations in male mice

A fase S (pré-leptoteno) da meiose masculina de camundongos C3H/HeJ e C57BL/6, foi exposta às doses 6,25; 12,50; 25 e 50 mg/kg de peso corpóreo do alcalóide pirrolizidínico integerrimina. Näo observamos efeitos sobre as aberraçöes cromossômicas, estruturais e numéricas, analisadas em diacinese/metáfase I

Combined effect of ethylmethane sulfonate and 60CO gamma radiation on the induction of lethal mutations in Drosophila melanogaster

Duas linhagens de Drosophila melanogaster foram tratadas com doses independentes e conjuntas de etilmetanosulfonato (EMS) e radiaçäo gama de 60CO. As linhagens Columbia (CO3) e Riverside, Califórnia (RC1) foram tratadas com três doses de EMS (0.003; 0.006 e 0.012 M), ou com quatro doses de radiaçäo (2,5; 5; 10 e 15 KR) ou, ainda, com três doses conjuntas dos dois mutagênicos (0.002M + 10 KR; 0.003 + 5 KR e 0.004M + 2.5 KR). Foram estudadas diferenças de sensibilidade entre as duas linhagens, quanto à induçäo de letais recessivos ligados ao sexo, e determinadas as relaçöes existentes entre altas doses de mutagênico e freqüência da mutaçäo induzida. A relaçäo entre dose de EMS e produçäo de letais se distribuiu dentro de uma curva parabólica. Tal comportamento decorreu ou da eliminaçäo seletiva das células mais sensíveis sob o ponto de vista da mutabilidade, ou da saturaçäo na capacidade de absorçäo do mutagênico, quando administrado em altas doses. Na dose de 0.006 M de EMS, a percentagem de letais obtida indicou a existência na linhagem CO3, de resistência à açäo deste mutagênico. No tratamento conjunto com EMS e radiaçäo, a linhagem CO3 apresentou um efeito sinergístico, enquanto a RC1 mostrou um efeito aditivo. Dados anteriores sugerem que a linhagem CO3 apresenta um mecanismo de reparo mais eficiente, já que o tratamento conjunto parece inibir as enzimas de reparo, a linhagem CO3 é mais atingida por este tipo de inibiçäo